Diseño y estandarización de un sistema PCR-SSCP del gen E6 para detección y tipificación del virus del papiloma humano (VPH)

Abstract

El VPH es considerado uno de los patógenos más comunes transmitidos sexualmente y el principal agente causal de neoplasias intraepiteliales cervicales (NIC) y cáncer cervical. Aproximadamente 40 de los genotipos conocidos han sido detectados en la mucosa anogenital y clasificados como VPH de alto y bajo riesgo. La mayoría de las pruebas para detección por PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) del ADN viral utiliza como blanco el gen L1. Sin embargo el efecto oncogénico depende de la expresión contínua de los genes E6 y E7 para la persistencia y transformación de fenotipos malignos de las células. El objetivo de esta investigación consistió en diseñar un sistema de PCR-SSCP del gen E6 para detectar y tipificar la presencia del virus en muestras del área genital. Se diseñaron los oligonucleótidos degenerados DAM_E6F/R1 que permitieron la amplificación mediante PCR de un fragmento de 214 pb del gen E6 de 25 tipos de VPH. Amplificados de los tipos virales 6, 11, 16 y 18 se sometieron a SSCP (Polimorfismo de Conformación de Cadena Sencilla) con la finalidad de determinar un patrón de movilidad electroforética por tipo de VPH obteniéndose patrones distintos para un mismo tipo de VPH. La SSCP resulta tan sensible para detectar diferencias de tan sólo un nucleótido que revela patrones de movilidad electroforética que nos permiten sugerir la existencia de variación nucleotídica intratipo en la región amplificada del ORF del gen E6.