Ensayo de dos métodos de extracción de ADN de ratón para ser usado en el control genético de ratones consanguíneos mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Abstract

La utilización de marcadores genéticos de tipo microsatélite es una herramienta importante para vigilar la pureza genética en las cepas consanguíneas de ratón. El primer paso para realizar este estudio es disponer de muestras de ADN con calidad y cantidad que permita su análisis mediante métodos de Biología Molecular. En este trabajo se ensayaron dos métodos de extracción de ADN, uno de ellos a partir de tejido de oreja mediante la Técnica HotSHOT y el otro utilizando muestras sanguíneas y basadas en una precipitación salina. Se determinó la calidad y la cantidad de ADN obtenido por ambos métodos, mediante electroforesis en gel de agarosa y espectrofotometría de luz ultravioleta respectivamente; también se probó la capacidad del ADN para ser digerido por la enzima de restricción Sal I y de ser amplificado mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Con el método de HotSHOT, se obtienen muestras de ADN, cuya cantidad promedio es de 51,56 µg, con un índice A260/A280. de 1,2 y no son digeribles por la enzima Sal I. Las muestras de ADN obtenidas por el método de precipitación salina, tienen una cantidad promedio de 13,50 µg, con un índice A260/A280. de 1,7; son digeribles por la enzima Sal I, lo cual las hace aptas para estudios donde se requiera hacer Southern blot. Dado que por ambos métodos se obtienen muestras amplificables por PCR, se seleccionó el método de HotSHOT, para el análisis de microsatélites, por ser un método rápido y económico. Los resultados obtenidos son fundamentales para iniciar los estudios de control genético a nivel molecular, en las líneas consanguíneas de ratones que se producen actualmente en cuatro bioterios del país.