Evaluación de un ensayo de PCR Duplex para la identificación de micobacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis y no tuberculosis

Abstract

La reemergencia de la tuberculosis como problema de salud pública a nivel mundial, hace imperativo el diseño de estrategias de diagnóstico rápido, sensible y específico para detectar tempranamente el patógeno. El objetivo de este trabajo fue evaluar un ensayo de PCR duplex para identificar micobacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis (TB) y no tuberculosis (NTB). En una única reacción de amplificación se incluyeron dos pares de oligonucleótidos y se estandarizaron sus temperaturas de alineamiento. Para detectar cualquier micobacteria (TB y NTB), se utilizó un par de oligonucleótidos dirigido a la secuencia conservada del gen 16S rRNA. Para identificar micobacterias del complejo TB, se utilizó otro par de oligonucleótidos dirigido a la secuencia del marco de lectura abierta identificado como Rv0577 en el genoma de la cepa de referencia H37Rv. Para validar el ensayo, se analizaron 50 aislados clínicos de micobacterias, incluyendo micobacterias del complejo TB y NTB. En todas las especies de micobacterias ensayadas con oligonucleótidos de 16S rRNA, se observó un amplicón esperado de 543 pb, confirmando que el par de oligonucleótidos utilizados tiene carácter género-específico. La amplificación con oligonucleótidos de Rv0577, rindió un producto de PCR de 786 pb solo en M. tuberculosis, M. bovis y M. bovis BCG, las cepas del complejo TB analizadas en este estudio, el cual estaba ausente en micobacterias NTB. Dada la especificidad del par de oligonucleótidos utilizados, este ensayo de PCR duplex puede contribuir al diagnóstico de micobacteriosis y ser utilizado para identificar micobacterias del complejo tuberculosis y no tuberculosis en muestras clínicas humanas y de animales.